ⅠNucleic acidipasiuna
Ang nucleic acid gibahin ngadto sa deoxyribonucleic acid (DNA) ug ribonucleic acid (RNA), diin ang RNA gibahin ngadto sa ribosomal RNA(rRNA), messenger RNA(mRNA) ug transfer RNA(tRNA) sumala sa lain-laing mga gimbuhaton niini.Ang DNA nag-una nga gikonsentrar sa nucleus, mitochondria ug chloroform, samtang ang RNA kasagarang giapod-apod sa cytoplasm.Ingon nga materyal nga sukaranan sa ekspresyon sa gene, ang pagkuha sa nucleic acid adunay hinungdanon nga papel sa panukiduki sa biology sa molekula ug pagdayagnos sa klinikal nga molekula.Ang konsentrasyon ug kaputli sa pagkuha sa nucleic acid direktang makaapekto sa sunod nga PCR, sequencing, vector construction, enzyme digestion ug uban pang mga eksperimento.
Ⅱ Nucleic acid extraction ug purification method
① Pamaagi sa pagkuha sa phenol/chloroform
Ang phenol/chloroform extraction kay usa ka klasikal nga pamaagi para sa DNA extraction, nga kasagaran naggamit ug duha ka lain-laing organic solvents para sa pagtratar sa mga sample, pagtunaw sa DNA base sa nucleic acid sa water phase, lipids sa organic phase, ug mga protina tali sa duha ka phase.Kini nga pamaagi adunay mga bentaha sa ubos nga gasto, taas nga kaputli ug maayong epekto.Ang mga disbentaha mao ang komplikado nga operasyon ug taas nga panahon.
② Trizol nga pamaagi
Ang pamaagi sa Trizol usa ka klasikal nga pamaagi alang sa pagkuha sa RNA.Ang Trizol nga pamaagi gibahin ngadto sa aqueous phase ug organic phase human sa centrifugation nga adunay chloroform, diin ang RNA natunaw sa tubig nga hugna, ang aqueous phase gibalhin ngadto sa usa ka bag-o nga EP tube, ang ulan nakuha human sa pagdugang sa isopropanol, ug dayon ang pagputli sa ethanol.Kini nga pamaagi angay alang sa pagkuha sa RNA gikan sa mga tisyu sa hayop, mga selula ug bakterya.
③ Centrifugal column nga pamaagi sa pagputli
Ang centrifuge column purification method mahimo nga mag-adsorb sa DNA ilabi na pinaagi sa espesyal nga silicon matrix adsorption nga mga materyales, samtang ang RNA ug protina mahimong moagi nga hapsay, ug dayon gamiton ang taas nga asin ubos nga PH aron makombinar ang nucleic acid, ubos nga asin nga taas nga PH value elution aron sa pagbulag ug pagputli sa nucleic acid.Ang mga bentaha mao ang taas nga konsentrasyon sa pagputli, taas nga kalig-on, dili kinahanglan alang sa organikong solvent, ug mubu nga gasto.Ang disbentaha mao nga kini kinahanglan nga centrifuged lakang sa lakang, dugang nga mga lakang sa operasyon.
④ Magnetic beads nga pamaagi
Ang pamaagi sa magnetic beads mao ang pagbahin sa sample sa cell tissue pinaagi sa lysate, buhian ang nucleic acid sa sample, ug dayon ang mga molekula sa nucleic acid espesipikong adsorbed sa nawong sa magnetic bead, samtang ang mga hugaw sama sa mga protina ug asukal nahabilin sa ang likido.Pinaagi sa mga lakang sa cell tissue splitting, magnetic bead binding uban sa nucleic acid, nucleic acid paghugas, nucleic acid elution, ug uban pa, puro nucleic acid sa katapusan nakuha.Ang mga bentaha mao ang yano nga operasyon ug mubo nga paggamit sa oras, nga wala kinahanglan ang lakang nga centrifugation.Kini adunay ubos nga teknikal nga mga kinahanglanon ug makaamgo sa automatic ug mass operation.Ang piho nga kombinasyon sa magnetic bead ug nucleic acid naghimo sa gikuha nga nucleic acid nga adunay taas nga konsentrasyon ug kaputli.Ang disbentaha kay medyo mahal ang presyo sa merkado karon.
⑤ Ubang mga pamaagi
Dugang pa sa upat ka mga pamaagi sa ibabaw, adunay nagbukal nga cracking, concentrated salt method, anionic detergent method, ultrasonic method ug enzymatic method, etc.
Ⅲ Uri sa pagkuha sa nucleic acid
Ang Foregene adunay nanguna nga Direct PCR nga plataporma sa kalibutan, doble nga kolum nga RNA Isolation platform(DNA-only + RNA lang ).Ang mga nag-unang produkto naglakip sa DNA/RNA isolation kits, PCR ug Direct PCR reagents molecular lab reagents series.
① Kinatibuk-ang pagkuha sa RNA
Ang kinatibuk-ang mga sample sa pagkuha sa RNA naglakip sa dugo, mga selula, mga tisyu sa hayop, mga tanum, mga virus, ug uban pa. Ang taas nga kaputli ug taas nga konsentrasyon sa kinatibuk-ang RNA mahimong makuha pinaagi sa total nga pagkuha sa RNA, nga mahimong gamiton sa RT-PCR, pagtuki sa chip, in vitro nga paghubad, molecular cloning, Dot Blot ug uban pang mga eksperimento.
May kalabotan sa foregeneRNA Isolation Kits
Animal Total RNA Isolation Kit--Dali ug episyente nga makuha ang taas nga kaputli ug taas nga kalidad nga kinatibuk-ang RNA gikan sa lainlaing mga tisyu sa hayop.
Cell Total RNA Isolation Kit--Ang labi ka naputli ug taas nga kalidad nga kinatibuk-ang RNA makuha gikan sa lainlaing mga kultura nga mga selula sa 11 minuto.
Tanum Total RNA Isolation Kit--Pagdali sa pagkuha sa taas nga kalidad nga kinatibuk-ang RNA gikan sa mga sample sa tanum nga adunay ubos nga polysaccharide ug polyphenol nga sulud.
Viral RNA Isolation Kit--Paspas nga ihimulag ug putli ang viral RNA gikan sa mga sample sama sa plasma, serum, cell-free nga mga likido sa lawas ug mga supernatant sa cell culture.
② Pagkuha sa genomic DNA
Ang mga sample sa pagkuha sa genomic DNA naglakip sa yuta, hugaw, dugo, mga selula, tisyu sa hayop, mga tanum, mga virus, ug uban pa. Ang pagkuha sa genomic DNA mahimong magamit sa pagtunaw sa enzyme, pagtukod sa librarya sa DNA, PCR, pag-andam sa antibody, pag-analisa sa Western blot hybridization, gene chip, taas -throughput sequencing ug uban pang mga eksperimento.
May kalabotan sa foregeneDNA Isolation Kits
Animal Tissue DNA Isolation Kit--Pabilis nga pagkuha ug pagputli sa genomic DNA gikan sa daghang mga tinubdan, sama sa mga tisyu sa hayop, mga selula, ug uban pa.
Dugo DNA Midi Kit (1-5ml)--Dali nga putli ang taas nga kalidad nga genomic DNA gikan sa anticoagulated nga dugo (1-5ml).
Buccal Swab/FTA Card DNA Isolation Kit--Dali nga limpyohan ang taas nga kalidad nga genomic DNA gikan sa buccal swab/FTA Card sample.
Plant DNA Isolation Kit--Dali nga pagputli ug pagkuha sa taas nga kalidad nga genomic DNA gikan sa mga sample sa tanum (lakip ang polysaccharides ug polyphenol nga mga sample sa tanum)
③ Pagkuha sa plasmid
Ang plasmid usa ka klase nga gamay nga lingin nga molekula nga DNA sa mga selyula, nga usa ka sagad nga tigdala alang sa pag-recombination sa DNA.Ang pamaagi sa pagkuha sa plasmid mao ang pagtangtang sa RNA, pagbulag sa plasmid gikan sa genomic DNA sa bakterya, ug pagtangtang sa protina ug uban pang mga hugaw aron makuha ang medyo puro nga plasmid.
Kinatibuk-ang Plasmid Mini Kit--Dali nga limpyohan ang taas nga kalidad nga plasmid DNA gikan sa nabag-o nga bakterya alang sa naandan nga mga eksperimento sa biology sa molekula sama sa pagbag-o ug pagtunaw sa enzyme
④ Ubang mga tipo sa pagkuha, miRNA extraction, etc.
Animal miRNA Isolation Kit--Dali ug episyente nga pagkuha sa gagmay nga mga tipik sa RNA sa 20-200nt miRNA, siRNA, snRNA gikan sa lainlaing mga tisyu ug mga selula sa hayop
Ⅳ Mga kinahanglanon alang sa pagkuha sa nucleic acid ug resulta sa pagputlis
① Aron maseguro ang integridad sa nag-unang istruktura sa nucleic acid.
② Pagpakunhod sa interference sa mga protina, asukar, lipid ug uban pang mga macromolecules
③ Kinahanglang walay organikong solvent o taas nga konsentrasyon sa mga metal ions nga makapugong sa enzyme sa mga sample sa nucleic acid.
④ Ang RNA ug uban pang kontaminasyon sa nucleic acid kinahanglan nga wagtangon sa pagkuha sa DNA, ug vice versa.
Oras sa pag-post: Nob-24-2022
